Метод иммунодиагностической микропленки

Здравоохранение материалы / Экспресс диагностика особо опасных инфекций / Экспресс-диагностика холеры / Метод иммунодиагностической микропленки

Изучение антигенных свойств холерных вибрионов проводят путем постановки пробирочной или пластинчатой реакции агглютинации с использованием сухих лиофилизированных диагностических агглютинирующих холерных 0-сывороток и сывороток Огава и Инаба. Сыворотку раз­водят в физиологическом растворе или дистиллированной воде и смешивают при постановке агглютинации на стекле с исследуемой культурой вибрионов. При подготовке сы­воротки используется дополнительная посуда, что услож­няет работу бактериолога, а в оставшейся разведенной сы­воротке быстро прорастает бактериальная микрофлора и инактивирует ее.

Для изучения антигенной структуры холерных вибрио­нов были разработан иммунодиагностический препарат в виде микропленок разового применения, который обладал достаточной специфичностью, демонстративностью и экономичностью. Иммунодиагностические холерные микропленки (ИХМП) в виде полимерной плен­ки с нанесенными высушенными каплями, фиксированны­ми на бумаге, содержат минимальное количество сыворот­ки, пленкообразующий компонент и консервант. Пленко­образующий компонент связывает, склеивает и фиксирует микроколичества ингредиентов к поверхности носителя, исключает крошение микропленок; консервант предохраня­ет препарат от разрушения при длительном хранении.

Концентрация диагностической сыворотки в ИХМП яв­ляется достаточной, поскольку после эмульгирования в капле физраствора, антитела содержатся в титре 1:100, что полностью обеспечивает ход реакции. Тем самым обеспечивается достаточная концентрация антител, снижается, расход диагностической сыворотки и исключается возможность ее неиспользования. При этом создаются условия для быстрого растворения ИХМП, контакта ее с холерными вибрионами и проведения реакции непосредственно на по­лимерной пленке.

Готовые ИХМП хранят в темном сухом месте при 4— 7°С в картонных коробках (срок годности 3 года — срок наблюдения) и по мере надобности ИХМП используют для определения холерных вибрионов. Для исключения случай­ного заражения окружающих предметов ИХМП помеща­ют в чистую чашку Петри. На поверхность ИХМП наносят каплю физиологического раствора, в которой растворяют ее. Разведенную сыворотку смешивают с изучаемой куль­турой вибрионов, снятой бактериологической петлей с пи­тательной среды. При другом варианте постановки реак­ции ИХМП снимают скальпелем с бумажной подложки и переносят на предметное стекло, растворяют в капле физиологического раствора и смешивают с изучаемой культу­рой вибрионов.

При положительной реакции через 1—3 мин появляют­ся зерна агглютината, окрашенные в зеленый цвет, а кап­ля просветляется. При отрицательной реакции капля оста­ется гомогенно-мутной.

Использованную часть полимерной пленки отрезают, а ос­тавшуюся часть пленки с ИХМП сохраняют в той же чаш­ке Петри для дальнейших исследований. Использование ИХМП в исследованиях вибрионов и других микроорга­низмов позволяет получить статистически достоверные ре­зультаты, сэкономить дорогостоящие диагностические сы­воротки, повысить качество и эффективность исследований.